Conventional and real-time PCR assays for detection and identification of Rhizoctonia solani AG-2-2, the causal agent of root rot of sugar beet

Abstract

Soil-borne fungi belonging to the genus Rhizoctonia are considered to be among the most destructive sugar beet pathogens. Although multinucleate R. solani AG-2-2 is frequently detected as the main causal agent of root rot of sugar beet worldwide, several binucleate (AG-A, AG-E and AG-K) and multinucleate Rhizoctonia (R. solani AG-4, AG-5 and AG-8) have also been included in the disease complex. Due to their soil-borne nature and wide host range, the management of Rhizoctonia root rot of sugar beet is highly demanding. Identification of Rhizoctonia AG associated with root rot of sugar beet is the essential first step in determining a successful disease management strategy. In this paper we report a highly specific and sensitive real-time PCR protocol for detection of R. solani AG-2-2 which showed a high level of specificity after testing against 10 different anastomosis groups and subgroups, including AG-2-1 as the most closely related. Moreover, a similar conventional PCR assay showed the same specificity but proved to be at least a 100 times less sensitive. Future research will include further testing and adaptation of this protocol for direct detection and quantification of R. solani AG-2-2 in different substrates, including plant tissue and soil samples.

Smatra se da su gljive iz roda Rhizoctonia koje se održavaju u zemljištu, najdestruktivniji patogeni šećerne repe. Mada je širom sveta višejedarna R. solani AG-2-2 najčešće označena kao najvažniji prouzrokovač truleži korena šećerne repe, nekoliko dvojedarnih (AG-A, AG-E i AG-K) kao i višejedarnih Rhizoctonia (R. solani AG-4, AG-5 i AG-8) takođe mogu da učestvuju u kompleksu bolesti. Kako se održavaju u zemljištu i imaju širok krug domaćina, suzbijanje vrsta Rhizoctonia koje izazivaju trulež korena šećerne repe veoma je zahtevno. Identifikacija anastomoznih grupa prouzrokovača oboljenja predstavlja neophodan prvi korak u uspostavljanju uspešnog suzbijanja. U ovom radu razvijen je visokospecifičan i osetljiv real-time PCR protokol za detekciju i identifikaciju R. solani AG-2-2 koji se pokazao kao visokospecifičan nakon testiranja koja su obuhvatila 10 različitih AG grupa i podgrupa, uključujući i AG-2-1 kao najsrodniju. Sličan konvencionalni PCR protokol ispoljio je istu specifičnost, ali i najmanje 100 × manju osetljivost. Buduća istraživanja uključiće dalje testiranje i adaptaciju ovog protokola za direktnu detekciju i kvantifikaciju R. solani AG-2-2 u različitim uzorcima, uključujući biljno tkivo i zemljište.